Un estudio del IIS La Fe propone un nuevo método para aislamiento de microRNAs en plasma

Investigadores del IIS La Fe han puesto a punto un método para el aislamiento de microRNAs (miRNAs) en plasma que elimina muchos de los problemas observados con la utilización de diferentes protocolos disponibles.

El estudio, dirigido por los doctores Luis Andrés Ramón y Silvia Navarro, investigadores del Grupo Acreditado para el estudio de la Hemostasia, Trombosis, Arteriosclerosis y Biología Vascular del IIS La Fe, se ha publicado en la revista PlosOne.

En este estudio, los investigadores analizan por RT-qPCR la presencia de inhibidores de PCR, la abundancia relativa de varios miRNAs seleccionados con diferente contenido de GC y diferente estabilidad termodinámica (definida como el incremento de energía libre, ΔG, de la estructura secundaria más estable de los miRNAs), usando dos protocolos comerciales diferentes y en presencia o ausencia de dos RNA carriers. También emplean dos estrategias de normalización para seleccionar aquella que induce una menor variabilidad entre los protocolos. Demuestran que el uso de yeast RNA como carrier aumenta la eficacia del aislamiento de miRNAs comparado con el uso de MS2 RNA, y esta eficacia también varía dependiendo del protocolo de aislamiento utilizado. Así, con el protocolo de aislamiento modificado mediante fenol (Qiagen) junto con el uso de yeast RNA como carrier, se recuperan principalmente los miRNAs más abundantes. Con el protocolo de aislamiento basado en columnas (Exiqon) junto con el uso de yeast RNA como carrier, se recuperan principalmente aquellos miRNAs con un bajo contenido de GC y baja ΔG. En cuanto a la normalización, los investigadores recomiendan utilizar un miRNA de referencia interna en lugar de hacerlo por el volumen de plasma. Este miRNA debe mostrar valores constantes de Cq entre muestras. Todo ello demuestra que es necesaria una estandarización de las condiciones previas y analíticas para obtener resultados reproducibles entre distintos laboratorios en los estudios de miRNA en plasma.

Ramón-Núñez LA, Martos L, Fernández-Pardo Á, Oto J, Medina P, España F, Navarro S. (2017) Comparison of protocols and RNA carriers for plasma miRNA isolation. Unraveling RNA carrier influence on miRNA isolation. PLoS ONE 12(10): e0187005. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187005